欧美一级黄色片免费看丨91看毛片丨亚洲国产成人久久综合碰碰丨久激情内射婷内射蜜桃人妖丨香蕉网站视频丨国产成人精品日本亚洲网站丨日韩精品影视丨九九久久99丨秋霞中文字幕丨毛片av网址丨youjizzcom国产丨91在线最新丨天天视频亚洲丨日韩一区二区三区射精-百度丨日韩精品极品视频在线丨男女艹逼网站丨午夜美女国产毛片福利视频丨国产精成人品日日拍夜夜丨精品国产青草久久久久福利丨日本ww色

β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）試劑盒說明書

微量法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。

測定原理：

β-1,3-GA 水解昆布多糖，內切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產生還原末端，通過測定還原糖生成速率來計算其酶活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入2mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑二：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或 200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL 提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至550nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，95℃水浴 5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 550nm處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數），ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。

β-1,3-GA 活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y=0.0958x-0.0192；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

(1) 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)

=10.438×(ΔA +0.0192)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)

= 10.438×(ΔA +0.0192)÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /10⁴cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)

=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.035mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y =0.0479x-0.0192；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

(1) 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)

=20.876×(ΔA +0.0192)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)

= 20.876×(ΔA +0.0192)÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /10⁴cell)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)

=0.0416×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.035mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

總抗氧化能力試劑盒說明書可見分光光度法